天地人和 | yyds！全新Strep-tag Ⅱ标签亲和介质，你值得一试~

上一期主要介绍了天地人和第二代产品 Streptactin Beads 4FF，二代产品的高特异性、高纯度、低浓度条件下的高亲和力等特点也延续到三代产品STarm Streptactin Beads 4FF中。三代产品选择Streptactin的突变体作为配体蛋白，在纯化中具有更突出的优势。

二代产品在洗脱后需要用HABA再生去除D-脱硫生物素，三代产品D-生物素洗脱后只需用PBS就能进行再生清洗。

图1.使用PBS清洗介质后再纯化效果电泳图

考虑到脱硫生物素的成本和货期，很多客户再使用二代产品时，任然会选择D-生物素洗脱。同时使用D-生物素对二代和三代产品进行洗脱时，填料的重复使用效果就会有明显的不同，我们进行了一个对比实验，且每次纯化后使用0.1M NaOH对填料进行彻底的清洗。

图2.Streptactin Beads 4FF 使用0.1M NaOH再生后纯化电泳图

图3. STarm Streptactin Beads 4FF 使用0.1M NaOH再生后纯化电泳图

图4. STarm Streptactin Beads 4FF循环载量变化图

结论：从图2和图3的对比来看，哪怕使用氢氧化钠对二代介质再生，其再生效果都比较差，但我们新的三代产品，再生之后可重复使用的效果就保持的很好，而且经过再生循环检测，在位清洗35次后，还能保证80%以上的介质载量。

填料的试剂耐受主要分两个部分，一是配体耐受的试剂浓度，二是配体在结合蛋白时的耐受试剂浓度。

配体耐受的试剂浓度可以在在位清洗步骤作为参考，当填料纯化后有杂质堆积时，可以用变性剂、高盐、强碱等对填料进行在位清洗。上面已经介绍了使用0.1M NaOH清洗的循环数据，三代产品的配体蛋白也能耐受8M尿素、6M盐酸胍和2M 氯化钠。清洗前后载量保持不变，不会导致配体脱落或者失活。

不同来源的蛋白在纯化前所在溶液中的试剂也会有不同，下表列出了一部分不会影响标签和配体结合效果的试剂浓度。

表1. STarm Streptactin Beads 4FF结合蛋白时耐受的试剂浓度

最后我们对二代和三代产品基本性能做了一个对比，让大家更直观的看到三代产品的提升。

表2. 二代产品和三代产品的性能差异

图5.Strep-tag Ⅱ和Twin Strep -tag Ⅱ结合Streptaction示意图

Twin Strep-Tag Ⅱ与 Strep-Tag Ⅱ相比提升了目标蛋白与Streptactin的链接强度，且与二代、三代产品都有较好的结合效果。

同时我们也能提供Twin Strep-tag II的大肠杆菌表达载体pSmart VI载体，该载体是在 pET-28a 载体的基础上改造而来预留了BamH I和Xho I的多克隆酶切位点，方便基因片段的插入，建议克隆方式为无缝克隆（这种方式不会额外增加氨基酸）。标签后插入了SUMO蛋白的核酸序列，促进蛋白的可溶性表达。同时还添加了RFP标签的核酸序列，可以应用于蛋白表达和纯化的鉴定，或者将该载体直接作为蛋白表达的阳性对照使用。

图6.pSmart Ⅵ 质粒图谱